市场监管总局发布《畜肉中(zhōng)卡拉胶的测定》食品补充检验方法

中(zhōng)國(guó)质(zhì)量新(xīn)闻网讯  6月14日，國(guó)家市场监管总局官网发布公(gōng)告称，按照《食品补充检验方法工(gōng)作(zuò)规定》有(yǒu)关规定，《畜肉中(zhōng)卡拉胶的测定》食品补充检验方法已经國(guó)家市场监督管理(lǐ)总局批准，现予发布。

畜肉中(zhōng)卡拉胶的测定（BJS 201804）

附件

畜肉中(zhōng)卡拉胶的测定

（BJS201804）

1　范围

本方法规定了生、鲜肉中(zhōng)卡拉胶的液相色谱-串联质(zhì)谱测定方法。

本方法适用(yòng)于生鲜肉、冷却肉、冻肉中(zhōng)卡拉胶的定量测定。

2　原理(lǐ)

样品经匀浆后，用(yòng)盐酸溶液处理(lǐ)，其中(zhōng)的卡拉胶降解生成特征性寡糖，用(yòng)液相色谱-串联三重四极杆质(zhì)谱检测寡糖含量，外标法定量。

3　试剂和材料

本方法所用(yòng)水為(wèi)符合GB/T 6682规定的一级水。

3.1　试剂

3.1.1乙腈（CH₃CN）：色谱纯。

3.1.2甲酸铵（HCOONH₄）：色谱纯。

3.1.3盐酸（HCl）：优级纯。

3.2　试剂配制

10 mM甲酸铵水溶液：称取甲酸铵（3.1.2）0.63 g，用(yòng)水溶解并定容至1000 mL。

3.3　标准品

卡拉胶：食品添加剂级。

3.4　标准储备液的配制

称取卡拉胶0.1 g（精(jīng)确至0.1 mg），用(yòng)60℃温水溶解，转移至10 mL容量瓶中(zhōng)，冷却至室温后，用(yòng)水定容至刻度。此溶液浓度為(wèi)10 mg/mL，现用(yòng)现配。

4　仪器和设备

4.1　高效液相色谱-串联质(zhì)谱仪：配有(yǒu)電(diàn)喷雾离子源（ESI源）。

4.2　分(fēn)析天平：感量為(wèi)0.0001g。

4.3　分(fēn)析天平：感量為(wèi)0.01g。

4.4　离心机：转速≥4 000 r/min。

4.5　涡旋混合器。

4.6　食品粉碎机。

4.7　匀浆机。

4.8　恒温水浴。

5　试样制备和保存

依据 GB/T9695.19-2008规定的方法取样。样品剔除脂肪组织，瘦肉部分(fēn)（＞100 g）用(yòng)食品粉碎机（4.6）粉碎混匀。

混匀好的样品分(fēn)成两份，分(fēn)别作(zuò)為(wèi)试样（＞50 g）和留样（＞50 g），装(zhuāng)入洁净容器中(zhōng)，密封并标记，于 -18 ℃保存。

6　试样处理(lǐ)

6.1基质(zhì)加标工(gōng)作(zuò)液

称取4份打碎混匀的空白基质(zhì)（确定不含卡拉胶的畜肉）各10 g（精(jīng)确至0.01 g）于50 mL离心管中(zhōng)，分(fēn)别加入标准储备液（3.4）0.1 mL，0.2 mL，0.3 mL，0.4 mL，加入水使液體(tǐ)的总體(tǐ)积為(wèi)23 mL，10000 rpm匀浆1 min，加入2 mL盐酸（3.1.3），加盖后涡旋30 s，置于80℃水浴中(zhōng)20 min，每10 min取出振摇一次。取出冷却后，4000 rpm离心5 min，取上清液1 mL，用(yòng)乙腈1:1稀释后，过滤膜（0.22 mm,有(yǒu)机相），待测。

6.2 样品待测液

称取10 g试样（精(jīng)确至0.01 g）于50 mL离心管中(zhōng)，加入23 mL水，10000 rpm匀浆1 min，加入2 mL盐酸（3.1.3），加盖后涡旋30 s，置于80℃水浴中(zhōng)20min，每10 min取出振摇一次。取出冷却后，4000 rpm离心5 min，取上清液1 mL，用(yòng)乙腈1:1稀释后，过滤膜（0.22 mm,有(yǒu)机相），待测。

7　测定

7.1参考液相色谱条件

7.1.1色谱柱：BEH Amide柱（粒径1.8 μm，2.1 mm ×50 mm），或性能(néng)相当者；

7.1.2 进样量：5 µL；

7.1.3 柱温：30℃；

7.1.4 流速：0.3 mL/min；

7.1.5流动相：A相：10 mM甲酸铵水溶液（3.2）；B相：乙腈（3.1.1）。梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

7.2参考质(zhì)谱条件

7.2.1 离子化方式：電(diàn)喷雾電(diàn)离；

7.2.2扫描方式：负离子扫描；

7.2.3 检测方式：多(duō)反应监测（MRM）。

雾化气、鞘气、碰撞气均為(wèi)高纯氮气或其他(tā)合适气體(tǐ)，源内裂解電(diàn)压（fragmentorVoltage）、碰撞能(néng)量（CE）等参数使用(yòng)前应调节，使质(zhì)谱灵敏度达到检测要求，参考条件详见附录A。

监测离子对信息参见附录A中(zhōng)的表A.1和附录C中(zhōng)的表C.1。

7.3定性测定

在相同实验条件下测定基质(zhì)加标工(gōng)作(zuò)液和样品待测液，若样品溶液中(zhōng)检出色谱峰的保留时间与相应基质(zhì)加标工(gōng)作(zuò)液色谱峰的保留时间一致，且样品溶液的质(zhì)谱离子对相对丰度与浓度相当基质(zhì)加标工(gōng)作(zuò)液的质(zhì)谱离子对相对丰度相比较，相对离子丰度（k）的相对偏差不超过表2规定的范围，则可(kě)判定样品中(zhōng)存在卡拉胶。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

7.4定量测定

以基质(zhì)加标工(gōng)作(zuò)溶液中(zhōng)含卡拉胶的质(zhì)量為(wèi)横坐(zuò)标，以定量离子的峰面积為(wèi)纵坐(zuò)标绘制标准工(gōng)作(zuò)曲線(xiàn)。按外标法计算得到待测样品中(zhōng)卡拉胶的含量。

在上述色谱和质(zhì)谱条件下，基质(zhì)加标工(gōng)作(zuò)液的卡拉胶降解产(chǎn)物(wù)提取离子色谱图见附录B 中(zhōng)的图B.1。

7.5 空白试验

除不加试样外，均按样品待测液（6.2）同法操作(zuò)。

8　结果计算

结果按下式计算：

式中(zhōng)：

X — 试样中(zhōng)卡拉胶的含量，单位為(wèi)克每千克（g/kg）；

m — 由基质(zhì)加标工(gōng)作(zuò)曲線(xiàn)计算出的供试品溶液中(zhōng)卡拉胶的含量，单位為(wèi)毫克（mg）；

M — 试样的质(zhì)量，单位為(wèi)克（g）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有(yǒu)效数字。

9方法精(jīng)密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15％。

10方法检出限和定量限

本方法对卡拉胶检出限為(wèi)0.02 g/kg；定量限為(wèi)0.06 g/kg。

11　方法准确度

本方法卡拉胶在0.1～0.4 g/kg添加浓度范围内，回收率為(wèi)80%~120%。

12　阳性结果的确证

检测到的阳性结果，可(kě)使用(yòng)高分(fēn)辨质(zhì)谱方法进行确证。

使用(yòng)与串联三重四极杆质(zhì)谱法相同的色谱参数，进行一级质(zhì)谱信息采集。可(kě)用(yòng)于确证的离子列表见附录C中(zhōng)的表C.2。

当质(zhì)谱中(zhōng)出现2种或2种以上列表中(zhōng)的单電(diàn)荷离子或双電(diàn)荷离子时，可(kě)确证阳性结果。

A  

A           

附录A

参考质(zhì)谱条件

负离子模式扫描质(zhì)谱条件

a)       离子源：電(diàn)喷雾离子源（ESI源）；

b)       检测方式：多(duō)反应监测（MRM）；

c)        毛细管電(diàn)压： -4000 V（ESI-）；

d)       干燥气温度：200℃；

e)       干燥气流量：5 L/min

f)        雾化气压力：30 psi；

g)       鞘气温度：280℃；

h)       鞘气流量：8 L/min；

上述参考质(zhì)谱条件仅供参考，当采用(yòng)不同质(zhì)谱仪器时，仪器参数可(kě)能(néng)存在差异，测定前应将质(zhì)谱参数优化到最佳。

表A.1　卡拉胶降解产(chǎn)物(wù)的定性离子对、定量离子、碎裂電(diàn)压和碰撞能(néng)量

注：1、标*的為(wèi)定量离子；2、以上两对MRM均可(kě)使用(yòng)，测定中(zhōng)可(kě)使用(yòng)灵敏度较高者，本方法给出的检出限、定量限、灵敏度等指标是基于以403為(wèi)母离子的离子对数据。